Количественное определение лекарственных средств в биологических жидкостях

Следует отметить, что как правило, процесс анализа включает в себя несколько механизмов одновременно. Например, адсорбционное разделение довольно часто бывает осложнено распределительным. При этом, чем больше различаются исследуемые вещества в смеси (по молекулярной массе, ионизации, основности или кислотности), тем вероятнее будет появление какого-то еще механизма. На разделение смеси из 15 веществ уходит около 20 минут.
Исследуемую смесь веществ растворяют в подвижной фазе и с помощью дозатора помещают в специальное устройство. Туда же под давлением подается и ПФ. По мере продвижения подвижной фазы на колонке происходит разделение анализируемой смеси. Чем меньше сродство компонента к подвижной фазе и больше к НФ, тем медленнее компонент будет продвигаться по колонке и дольше в ней удерживается. С помощью устройства для термостатирования поддерживается определенный температурный режим.
Пример количественного определения вещества методом ВЭЖХ
Количественное определение проводят по хроматограмме, учитывая параметры удерживания компонентов или УФ – спектры.
Количественное содержание веществ методом ВЭЖХ или индивидуального вещества в смеси определяют
методом внутреннего стандарта
с помощью градуировочного графика
сравнением площадей пиков стандартного и анализируемого вещества при одинаковых условиях
Тропикамид - белый кристаллический порошок. Он хорошо растворим в этаноле, хлороформе, воде. Температура плавления тропикамида 97С.
Раствор вещества с концентрацией 100 мкг\мл анализировали на жидкостном хроматографе, на колонке размером 2х75 мм, с обращенной фазой, зернением 5 мкм. Детектирование проводили при 200, 220, 250, 300 нм. В качестве ПФ выступали раствор кислоты трифторуксусной (ТФУ) 0,1% и ацетонитрил 100%. Градиент от 5 до 50% при температуре колонки 35 °С и скорости потока 150 мкл/мин. При данных условиях пик на хроматограмме и характерный спектр свидетельствуют о выходе тропикамида через 7,2 минуты.
Количественное определение тропикамида проводилось методом ВЭЖХ по калибровочному графику, построенному с использованием спиртовых растворов тропикамида концентраций 50, 100, 200 мкг/мл.

Определение тропикамида методом ВЭЖХ (хроматограмма)

В настоящее время для анализа методом ВЭЖХ используют современные жидкостные хроматографы, которые снабжены микропроцессором и различными устройствами, позволяющими производить ввод пробы автоматически, поддерживать условия процесса по заданной программе, с помощью специальных программ проводить расчет количественного состава исследуемой смеси.

Комбинированные методы
Особенно хорошие результаты в биофармацевтическом анализе были достигнуты при комбинированном применении газожидкостного хроматографа и масс-спектрометра в одном приборе (хромато-масс-спектрометрия). На основе такого сочетания был создан принципиально новый метод анализа трудноразделяемых смесей — масс-фрагментография. Суть метода заключается в том, что масс-спектрометр используется как высокочувствительный детектор к газовому хроматографу. Основное достоинство масс-фрагментографии — чрезвычайно большая чувствительность, достигающая нескольких пикограммов (1 пг= 10-12 г). Это в 1000-10 000 раз выше, чему ГЖХ. Высокая специфичность позволяет анализировать неразделенные компоненты этих смесей, а высокая чувствительность дает возможность определять метаболиты ЛВ, применяемых в очень малых терапевтических дозах.
Иммунохимические методы
Для определения малых концентраций ЛВ и их метаболитов в биологических жидкостях (крови, моче, тканях), а также для изучения метаболизма и проведения фармакокинетических исследований применяют иммунохимические методы. Они основаны на высокочувствительной и специфичной реакции антител с гаптенами (соответствующими низкомолекулярными биологически активными соединениями) и на способности гаптена, содержащего специально введенную метку, конкурировать за активный центр антитела.














Заключение

Лекарственные средства представляют собой сложные химические системы, которые вступают в определенные взаимодействия с биологическими системами организма. На этот процесс существенно влияют самые различные факторы, известные под названием биофармацевтических факторов. Наиболее существенными из них являются полиморфизм, степень дисперсности, физические и химические свойства вспомогательных веществ, используемых при изготовлении лекарственных форм.
Помимо теоретического значения, которое имеют исследования в области биофармацевтического анализа для изучения вновь создаваемых ЛВ, несомненна и практическая роль этой отрасли знаний.
Следовательно, биофармацевтический анализ представляет собой своеобразный инструмент, необходимый для проведения не только биофармацевтических, но и фармакокинетических исследований.
















Список используемой литературы

1. http://www.chromatogramma.ru «Теория и практика хроматографии»2. Царев H.И., Царев В.И., Катраков И.Б. 156 с(Практическая газовая хроматография: Учебно-методическое пособие для студентов химического факультета по спецкурсу «Газохроматографические методы анализа».— Барнаул: Изд-во Алт. ун-та, 2000. 3. Введение в хроматографический анализ: методические разработки для студентов V курса фармацевтического факультета. – Нижний Новгород: Изд-во Нижегородской государственной медицинской академии, 20054. Жерносек А.К., Талуть И.Е. Ж 59 Аналитическая химия для будущих провизоров. Часть 1.Учебное пособие / А.К. Жерносек, И.Е. Талуть; Под ред. А.И. Жебентяева. – Витебск, ВГМУ, 2003. – 362 с.5. Экспериментальные методы химической кинетики: газожидкостная хроматография. Учебн. Пособие. / Под. ред. Н. М. Эммануэля и М. Г. Кузьмина. Москва: изд-во Московского университета, 1985 г.6. http://www.chem-astu.ru/chair/study/PCMA/r3_1.htm «Физико-химические методы анализа. Хроматографические методы анализа»

7. Кокорина Н. О., Новоселов В. П., Ханина М. А. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ В БИОЖИДКОСТЯХ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ // СМЖ (Томск). 2008. №4-2. С.51-53.














2