Источники микробной контаминации и методы микробиологического контроля воды в биотехнологическом производстве

Рис. 5. Полная схема контроляПримечание 1. Результаты посева фильтров на среде Эндо:-на фильтрах нет роста колоний или рост пленчатых, губчатых, плесневых колоний результат «отсутствие ОКБ и ТКБ в 100 см3 воды». Анализ закончен через 24 ч;-на фильтрах рост изолированных типичных лактозоположительных колоний подсчитывают число колоний каждого типа отдельно, подтверждают их принадлежность к ОКБ и ТКБ (исследуют не менее 34 колоний каждого типа) по оксидазному тесту; принадлежности по Граму; ферментации лактозы на лактозной среде при 37±1 °С за 48 ч для ОКБ и при 44±0,5 °С за 24 ч для ТКБ.Примечание 2. Результаты посева воды на среду накопления:-отсутствие помутнения и образования кислоты и газа в засеянных объемах воды результат «отсутствие ОКБ и ТКБ в 100 см3 воды». Анализ закончен через 24 ч;-из флаконов, где отмечено помутнение, образование кислоты и газа, а также помутнение и кислота при использовании ГПС или помутнение при использовании ЛПС, делают высев на среду Эндо. При отсутствии роста колоний или росте пленчатых, губчатых, плесневых колоний результат «отсутствие ОКБ и ТКБ в 100 см3 воды». Анализ закончен через 24 ч. Рост изолированных типичных лактозоположительных колоний подсчитывают число колоний каждого типа отдельно, подтверждают их принадлежность к ОКБ и ТКБ по оксидазному тесту; принадлежности по Граму; ферментации лактозы на лактозной среде при 37±1 °С за 48 ч для ОКБ и при 44±0,5 °С за 24 ч для ТКБ.Рис. 6. Посев воды на среду ГПС: а − отсутствуют признаки роста колиформных бактерий; б − типичные для колиформных бактерий признаки ростаПри упрощенной схеме контроля засевают два объема по 1 см3 исследуемой воды на среду КМАФАнМ (посев проводят параллельно на две чашки) и три объема по 100 см3 в концентрированные среды ЛПС или ГПС (посев в колбочки со средой накопления).Результаты посевов оценивают следующим образом:•при отсутствии признаков роста ОКБ в питательных средах ЛПС или ГПС, т.е. при отсутствии помутнения, газообразования и кислотообразования в каждой из трех засеянных колб (рис. 3, а) и при наличии КМАФАнМ не более 50 КОЕ/см3, контроль на этой стадии заканчивается и делается вывод о соответствии качества воды требованиям норм безопасности;•в противном случае, т.е. если наблюдаются какиелибо признаки развития на накопительной среде (рис. 6, б) и (или) КМАФАнМ составляет более 50 КОЕ/см3, следует незамедлительно уведомить в надлежащей форме производителей воды о ее несоответствии требованиям микробиологической безопасности. До получения требуемых показателей путем проведения повторного контроля по упрощенной схеме необходима обязательная обработка воды (пастеризация) перед использованием в производственном процессе.При получении положительных или сомнительных результатов на наличие БГКП можно провести дополнительные подтверждающие исследования в соответствии с полной схемой контроля качества воды.При контроле воды по полной схеме для определения ОКБ и ТКБ можно использовать как фильтрационный метод (мембранная фильтрация), так и титрационный (бродильный) с применением питательных сред.При использовании первого метода рост лактозоположительных колоний на фильтрах, размещенных на среде Эндо, устанавливается при проведении подтверждающих тестов:•микроскопировании окрашенных по Граму препаратов (отделение колоний, образуемых грамотрицательными неспорообразующими палочками);•оксидазного теста (дифференциация бактерий семейства Enterobacteriaceae от бактерий семейства Pseudomonadaceae и других водных сапрофитных бактерий);• сбраживания лактозы на лактозной среде для ОКБ при 37±1 °С за 48 ч и для ТКБ при 44±0,5 °С за 24 ч.На основании проведенных тестов делают вывод о принадлежности исследованных колоний к ОКБ/ТКБ (оксидазоотрицательные, грамотрицательные, ферментирующие лактозу с образованием кислоты и газа) и проводят количественный учет ОКБ/ТКБ в исследованном объеме воды.В случае отсутствия материалов и оборудования для выполнения анализа фильтрационным методом, а также припреобладании в воде посторонней микрофлоры, которая препятствует образованию на фильтрах изолированных колоний, характерных для колиформных бактерий, используют титрационный метод. Применение титрационного метода позволяет также количественно оценить присутствие ОКБ/ТКБ в исследуемом объеме воды.При наличии признаков роста хотя бы в одном из засеваемых объемов на среде накопления необходимо провести высев из этого объема на среду Эндо для получения изолированных колоний. Далее работают с изолированными типичными для колиформных бактерий колониями, проводя перечисленные выше подтверждающие тесты.Питательные среды высокого качества, требующиеся для контроля воды, в том числе и по полной схеме (КМАФАнМ или питательный агар, ЛПС или ГПС, Эндо, полужидкая среда с лактозой), выпускаются во ВНИИМСе. Однако результаты исследований зависят не только от качества сухих питательных сред, но и в значительной степени определяются соблюдением режимов приготовления рабочих питательных сред.Микробиологические показатели безопасности воды при контроле в условиях производственной лаборатории представлены в таблице 3.Таблица 3 - Микробиологические показатели безопасности водыПоказателиЕдиницы измеренияНормативыТКБЧисло бактерий в 100 см3*ОтсутствиеОКБЧисло бактерийв 100 см3*ОтсутствиеОМЧЧисло КОЕ/см3Не более 50* При определении проводится трехкратное исследование по 100 см3 воды.В МР приведена рекомендуемая периодичность контроля, которая зависит от вида водоснабжения (централизованное или собственное) и выпускаемой продукции (непосредственное использование воды в ходе технологического процесса или для технических целей). При стабильной ситуации воду контролируют при централизованном водоснабжении ежеквартально и при собственном водоснабжении ежемесячно. В то же время при появлении тех или иных характерных органолептических пороков продуктов или снижении их хранимоспособности проводят усиленный контроль воды с увеличением точек отбора проб и расширением числа контролируемых показателей.ЗаключениеВ настоящее время проводятся многочисленные исследования по совершенствованию технологии биотехнологического производства. Технология инъекционных лекарственных форм занимают одно из первых мест в фармацевтическом производстве. При их изготовлении используются различные лекарственные вещества, отвечающие дополнительным требованиям чистоты. Чтобы обеспечить стабильность инъекционных лекарственных форм, они должны быть изготовлены в асептических условиях с использованием стабилизаторов, антиоксидантов и микробиологических консервантов.При производстве инъекционных лекарственных форм все исходные и вспомогательные вещества, растворители должны быть допущены к медицинскому применению и соответствовать всем требованиям нормативных документов. Основными требованиями к инъекционным лекарственным формам являются: отсутствие механических примесей, стерильность, апирогенность, изотоничность, изоионичность, изогидричность.В связи с этим организация правильной технологии изготовления лекарственных форм является одной из ключевых задач биотехнологической промышленности.Библиографический списокXIV издание Государственной фармакопеи Российской Федерации - https://www.rosminzdrav.ru/poleznye-resursy/xiv-izdanie-gosudarstvennoy-farmakopei-rossiyskoy-federatsiiОФС.1.2.4.0002.15 Микробиологическая чистота - https://pharmacopoeia.ru/ofs-1-2-4-0002-15-mikrobiologicheskaya-chistota/ОФС.1.2.4.0003.15 Стерильность - https://pharmacopoeia.ru/ofs-1-2-4-0003-15-sterilnost-3/ФС.2.2.0020.15 Вода очищенная - http://pharmacopoeia.ru/fs-2-2-0020-15-voda-ochishhennaya/Микробиология / под ред. Зверева В.В., Бойченко М.Н. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2014. –608 с.Донецкая Э.Г.-А.Клиническая микробиология. Серия: Библиотека врача-специалиста. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. – 480 с.Федеральный закон «Об обращении лекарственных средств» от 12.04.2010 N 61-ФЗ (последняя редакция от 28.12.2017 № 425-ФЗ)Жилякова Е.Т. Технология изготовления лекарственных форм: учеб.пособие. - 2019. - 684 с.Брюханов В.М., Зверев Я.Ф., Лампатов В.В., Жариков А.Ю., Талалаева О.С. Лекции по фармакологии. - 2014. - 301 с.Аляутдин Р.Н. Фармакология: учебник / Р.Н. Аляутдин, Н.Г. Преферанский, Н.Г. Преферанская. - М.: ГЭОТАР-Медиа. - 2016. - 704 с.Камышева К.С.Основы микробиологии и иммунологии.Серия: Среднее медицинское образование. 3-е изд. – М.: Феникс, 2017. – 384 с.Мартынов С.Б., Глухов П.А. Высокоэффективная технология получения препарата "Вода для инъекций" // Знание. 2018. № 4-1 (56). С. 77-84. Ефимочкина Н.Р., Шевелева С.А., Нитяга И.М., Станкевич А.А., Романенко О.С. наиболее значимые виды микроорганизмов в отдельных группах пищевых продуктов //Российский журнал Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. 2019. № 4 (32). С. 417-427.Новик Е.С., Доренская А.В., Борисова Н.А., Гунар О.В. Особенности анализа лекарственных препаратов для парентерального применения методом электрочувствительных зон // Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. 2018. Т. 8. № 2. С. 123-127.Галушкина Е.И., Купов Х.А. Проведение контрольных замеров систем получения, хранения и распределения воды очищенной и воды для инъекций на ОАО НПК "ЭСКОМ". В сборнике: Физико-химическая биология. Материалы IV Международной научной Интернет-конференции. 2016. С. 16-19.