Биотехнология клеток животных и человек

Инкубирование в растворе первичных антител проводили прикомнатной температуре в течение одного часа. После промываний раствором0,2% Tween20 в PBS наносили раствор вторичных антител, конъюгированных с флюорохромом AlexaFluor488 (“Invitrogen”) и инкубировали препараты 45 минут при комнатной температуре в темноте.Ядра клеток подкрашивали раствором DAPI или Hoechst33258 (в концентрации 2х10-3мкг/мл). Препараты анализировали с помощью флуоресцентного микроскопа «Axioscope-2 («CarlZeiss», Германия) и программного обеспечения WinViewsoftware («RooperScientificPhotometrix») [3].Области применения и распространенияНа настоящий момент в отечественной и зарубежной научной литературе накоплено большое количество информации в плане применения культур клеток фибробластов, хотя отметим, что она довольно разрознена, по причине работы с ними сразу нескольких научных школ в разных частях света. Но общий принцип использования дермальных фибробластов, выделяемых из кожных биоптатов человека, имеющих высокий уровень секреторной активности и продуцирования компонентов внеклеточного матрикса, участвующихв поддержании тургора и эластичности кожи (проколлаген I типа, коллаген IV типа, фибронектинитропоэластин), заключается по большей части вприменении подобных культур дермальныхфибробластов в практической медицине и косметологии.Чаще всего культуры клеток фибробластов в регенеративной медицине, как правило эта практика прижилась в странах с высокими доходами населения, так как подобные косметологические услуги имеют достаточно высокую стоимость. Основные способы применения перечислены ниже:- нехирургическая коррекция возрастных изменений кожи;- коррекция атрофических рубцов, липодистрофии и склеродермии;- реконструктивная хирургия («клеточная реконструкция»), с использованием трансплантированных мягких тканей в сочетании со стволовыми клетками пациента, выделенными из жировой ткани;- эстетическая стоматология (закрытие рецессии десны);- восполнение дефектов мягких тканей лица[6];- устранение косметических дефектов кожи [4].Кроме эстетической хирургии фибропласты используют для лечения обширных ожоговых ран, мочевых свищей, восполнения структурной целостности голосовых связок, что обусловлено высокой терапевтической эффективностью фибробластов в следствие активации ими белкового синтеза, выделением факторов роста и усилением регенерации тканей[6].ЗаключениеПроведенная работа, дала возможность понять принципы выделения фибропластов – клетоксоединительной ткани организма, которые синтезируют внеклеточный матрикс, и секретируют мукополисахаридыи предшественников таких важных белков как коллаген и эластин, отвечающих за качество кожи и ее восстановление.В настоящее время известно несколько способов выделения фибробластов из кожи человека, точнее из источника развития фибробластов -мезенхимы.Фибропласты получают посредством ферментативной обработки, этот метод в настоящее время получил более широкое распространение, или механической дезагрегации образцов.Полученные культуры клеток должны пройти контроль чистоты, что бы исключить заражение бактериями, и иными микробиологическими агентами. Полученные культуры при помощи специальных тестов, которые в большинстве своем основываются на цитохимических, биохимических и цитоэнзиматических методах, оценивают на жизнеспособность. Культуры клетоккультивированных invitro, после соответствующих проверок используют в эстетической, ожоговой хирургии и т.д. В настоящий момент в отечественной и зарубежной научной литературе накоплено большое количество информации в плане применения культур клеток фибробластов.СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ИСТОЧНИКОВБыков В. Л. Цитология и общая гистология// СОТИС, Санкт-Петербург 2002 -стр. 286.Герасимов И. Г. Оценка жизнеспособности клеток по их морфометрическим параметрам на примере культивируемых фибробластов / И. Г. Герасимов, А. Г. Попандопуло // Цитология. – Т. 49, №3. – 2007. – С. 204-209.Данлыбаева Г.А. Морфо-функциональные характеристики новых штаммов диплоидных эмбриональных фибробластов для клеточной терапии / Г.А. Данлыбаева, В.Т. Кумашева, А.М. Мынбай, А.Н. Искакова, В.Б. [ и др.] //Scienceandworld. – 2014. – № 2 (6), Vol. I. – С. 106-111.Золотовицкая, H.H. Экспериментально-клиническая оценка эффективности применения культуры фибробластов / Н.Н. Золотовицкая, Колсанов А.В., Иванова В.Д., Волова Л.Т., Дорожкина Е.Б. // Клиническая анатомия и экспериментальная хирургия: Ежегодник Российской ассоциации клинических анатомов в составе ВНОАГЭ. Приложение к журналу «Морфологические ведомости». – 2006. – № 6. – Р. 68—73.Зорина А.И. Фибробласты дермы: Особенности цитогенеза, цитофизиологии и возможности клинического применения / Зорина А.И., Бозо И.Я., Зорин В.Л. [и др.] // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. – 2011. – Т.6, №2. – С. 15–26.Левченко В.М. Сравнительная оценка морфофункциональных свойств фибробластов сельскохозяйственных животных: дис. на соиск. уч. степ. к.б.н. (06.02.01) /Владимир МихайловичЛевченко. - Ставрополь, 2016. - 114 с.URL: http://www.stgau.ru/science/dis/dis_presto/levchenko2016.pdf (дата обращения: 29.12.2020).Попова А.В. Фибробласты кожи человека: жизнеспособность и пролиферативная активность invitro после гамма-облучения / А.В. Попова, М.Л.Лим, Е.А.Губарева, А.Х. Каде// Кубанский научный медицинский вестник. 2014. №5. С. 95-101.Leda R. Castilho, AngelaMariaMoraes, Elisabeth F.P. Augusto, Michael Butler Animal Cell// Technology Taylor & Francis e-Library, 2008 –стр. 17Патент РФ № 2013150642/10,14.11.2013Способвыделения фибробластов,способ созданиябиотрансплантанта наихоснове (варианты)и способы регенерации ткани человека(ВАРИАНТЫ)// Патент России № 2567004. 2015. Бюл. № 30./ Козлов Г. В.ATCC Animal cell culture guide, 2014- стр.28-29