Иммунофлюоресцентный метод лабораторной диагностики инфекций

Рисунок 10. Показатели диагностической эффективности методов лабораторного иммунохимического исследования сифилиса3.2. Метод непрямой РИФ в диагностике паразитарных заболеванийНепрямую РИФ при диагностике паразитарных заболеваний проводят непосредственно на предметном стекле с фиксированными корпускулярными антигенами из взвеси простейших или среза тканей паразита. В данном случае оценка РИФ может иметь качественный и полуколичественный характер, поскольку на одно стекло могут быть нанесены разные разведения исследуемой сыворотки.Для проведения РИФ при диагностике паразитарных заболеваний используются известный антигенный препарат (специально размеченные предметные стекла с фиксированным корпускулярным антигеном); контрольные положительная и отрицательная сыворотки к известному антигену; люминесцирующая антивидовая сыворотка (конъюгат) и другие реагенты.Ход исследования включает подготовку рабочих растворов; титрование испытуемых сывороток и контрольных образцов сыворотки;нанесение оттитрованных испытуемых и контрольных образцов сывороток на специально размеченные предметные стекла с антигеном;инкубацию антигенных препаратов с образцами сывороток во влажной камере в соответствии с параметрами условий инкубации инструкции по применению набора реагентов;удаление непрореагировавших компонентов сыворотки путем трехкратного отмывания препаратов в растворе фосфатно-солевого буфера;высушивание препаратов при комнатной температуре;нанесение разведенного раствора люминесцирующей антисыворотки (конъюгата) на стекла с антигеном;повторную инкубацию препаратов во влажной камере при комнатной температуре;удаление непрореагировавших компонентов сыворотки путем трехкратного отмывания препаратов в растворе фосфатно-солевого буфера;повторную высушивание препаратов при комнатной температуре; нанесение забуференного глицерина на антигенные препараты;микроскопированиеполученных препаратов под покровным стеклом в сине-фиолетовой части спектра люминесцентного микроскопа.В настоящее время существуют наборы для диагностики лейшманиоза, эхинококкоза и других паразитарных заболеваний методом непрямой РИФ. ЗаключениеВ результате проведенного исследованияможно сделать следующие выводы:1) Реакции с использованием меченых антител или антигенов основаны на выявлении образовавшегосямежду ними иммунного комплекса антиген-антитело по метке одного из участников реакций, выявляемой либо визуально, либо с помощью специальных высокочувствительных приборов, позволяющих количественно выявить меченый субстрат и, следовательно, искомый антиген или антитело.2) Антитела способны необратимо связываться (метиться) с некоторыми химическими веществами без потери своей специфичности и свойств связываться с антигеном. Для такого мечения могут использовать красители, флуоресцирующие при облучении их коротковолновым светом (ультрафиолетовым, фиолетовым, синим), обычно используются различныефлуорохромы, чаще изотиоцианатфлуоресцеина.Выделяют 2 модификации РИФ: прямая и непрямая РИФ.Прямая РИФ основана на том, что антигены тканей или микробных клеток, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа. Если на предметном стекле находится искомый антиген, антитела фиксируются на нем. Непрямая РИФ проводится в 2 этапа, но отличается от прямого метода тем, что при ее использовании отсутствует необходимость в большом набор различных специфических флуоресцирующих антител, так как непрямой метод основан на использовании антиглобулиновых антител. Результатом непрямого исследования является выявление комплекса антиген микробов + антимикробные кроличьи антитела + антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. 3) Методы РИФ являются методами экспресс-диагностики и используются как для выявления антигенов возбудителей в материале от больного, так и для определения антител к возбудителю в сыворотке крови (серодиагностика). Согласно с проанализированными данными РИФ могут быть использованы для диагностики вирусных, бактериальных, паразитарных и других заболеваний. В клинической практике в подавляющем большинстве случаев используется метод непрямой РИФ. Список использованной литературы1. Иммунологические методы лабораторной диагностики паразитарных болезней; Методические указания. - М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 2018. - 47 с.2. Борисов Л. Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: Учебник. М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2005. - 736 с.: ил.3. Воробьев А.А, Быков А.С., Зверев В.В. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. 3-е изд., перераб. и доп, 2022. – 272 с. 4. Давлетшина Г. К. Микробиологические методы: учеб. пособие / Г. К. Давлетшина, М. М. Туйгунов, Ю. З. Габидуллин, А. А. Ахтариева, А. К. Булгаков, Т. А. Савченко. – Уфа: Изд-во ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава России, 2018. – 119 с. 5. Зверева В. В. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология : Т. 1 : учебник / ред. Зверева В. В. , Бойченко М. Н. - Москва : ГЭОТАР-Медиа, 2020. - 448 с. 6. Коротяев А. И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология : учебник для мед. вузов / А. И. Коротяев, С. А. Бабичев. — СПб. :СпецЛит, 2010. — 5е изд., испр. и доп. — 760 с. : ил.7. Марданлы С. Г. и др. Значение реакции иммунофлюоресценции в алгоритме современной диагностики сифилиса // Медицинский алфавит. – 2018. – Т. 1. – №. 10. – С. 62-65. 8. Новиков Д. К. Медицинская иммунология : учебное пособие для студентов медицинских вузов / Д. К. Новиков ; МЗРБ, ВГМУ. - [3-е изд., перераб. и доп.]. - Витебск : [ВГМУ], 2002. - 234 с.9. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) [Электронный ресурс]. Режим доступа: https://studopedia.su/6_42174_reaktsii-s-primeneniem-mechennih-at-i-ag.html (дата обращения 21.05.22).