Бактериологический метод исследования в диагностике скарлатины

Вглубь агара в нескольких местах необходимо сделать проколыбез прожигания петли (как в засеянных, так и незасеянных участках чашки) (см. рис. 2.2). Рисунок 2.2 – Техника посева S. pyogenesРост микроорганизмов в толще кровяного агара (т.е. в условиях ограниченного доступа кислорода) сопровождается максимально выраженной гемолитической реакцией.При использовании кровяного агара без добавления антимикробных компонентов чашки можно инкубировать в условиях обычной атмосферы. При использовании селективных сред чашки инкубируются в атмосфере с 5-7% содержанием СО2.Оптимальная температура инкубации – 35-37°C. Если после инкубации в течение 24 ч нет роста, следует инкубировать чашку еще в течение 24 ч и только затем делать оценку.Идентификация S. pyogenes проводится на основании:• морфологических особенностей роста;• фенотипических характеристик;• антигенной структуры (серологический метод).Морфологические особенности роста.Для S. pyogenes обязательно наличие гемолиза – зоны полного просветления шириной 2-3 мм вокруг колонии (см. рис. 2.3).Рисунок 2.3 – Зона бета-гемолиза вокруг колоний S. pyogenes на кровяном агареS. pyogenes образует 3 типа колоний:матовые: круглые колонии серовато-белого цвета 1-2 мм в диаметре с характерным слегка приподнятым центром;слизистые: колонии правильной круглой формы, блестящие, напоминающие своим видом капельки росы, диаметром 2-2,5 мм. Такие колонии образуют штаммы Ѕ. pyogenes, продуцирующие большое количество гиалуроновой кислоты (см. рис. 2.4);гладкие: относительно небольшие (1 мм в диаметре) колонии сферической формы с ровным краем и блестящей влажной поверхностью.Рисунок 2.4 – Слизистые колонии S. pyogenes на кровяном агареМикроорганизмы других видов рода Streptococcus, относящиеся к бета-гемолитическим стрептококкам серогруппы А, формируют очень мелкие колонии, зона гемолиза вокруг них значительно превышает размеры колоний.Фенотипические характеристики.Дальнейшая идентификация S. pyogenes проводится стандартными фенотипическими методами: каталазная реакция, определение чувствительности к бацитрацину и PYR-тест.Из всех бета-гемолитических стрептококков только S. pyogenes дает положительный PYR-тест и является чувствительным к бацитрацину. Другие виды могут давать положительный результат в одном из тестов (см. приложение В).Антигенная структура (серологический метод).Серологический метод основан на выявлении группового полисахарида клеточной стенки. Этот полисахарид не является поверхностной структурой клеточной стенки. Для взаимодействия со специфическими антителами, содержащимися в сыворотке, необходимо провести экстракцию антигена (см. рис. 2.5). Рисунок 2.5 – Схема строения БГСАЭкстракция может быть проведена с помощью кислоты или ферментов. Реакция взаимодействия антигена с антителом визуализируется по видимой агглютинации (тесты коагглютинации и латекс-агглютинации), по изменению цвета (хроматографический тест), либо по другим изменениям в зависимости от конкретной тест-системы. Процедура исследования проводится в соответствии с инструкцией на конкретную тест-систему.Подводя итог 2-ой главы,для бактериологического исследования при скарлатине материалом служат мазки из носоглотки, которые при классическом культуральном исследовании засеваются на кровяной агар. ЗАКЛЮЧЕНИЕВ результате проведенного исследования можно сделать следующие выводы:1) Возбудителем скарлатины является бета-гемолитический стрептококк группы А (БГСА), также известный как S. pyogenes – грамположительный кокк,устойчивый во внешней среде, чувствительный к воздействию дезинфицирующих средств и антибиотиков. Скарлатина возникает только в том случае, когда инфицирование происходит высокотоксигенными штаммами, продуцирующими, в частности, эритрогенные токсины и имеющими другие факторы патогенности.Помимо скарлатины БГСАвызывает около 40 форм стрептококковой инфекции. Скарлатина условно относится к группе детских инфекций (более 90% заболевших скарлатиной – дети).Резервуаром и источником БГСА является больной ангиной, скарлатиной и другими клиническими формами респираторной стрептококковой инфекции, а также здоровые носители стрептококков группы А. Механизмы передачи БГСА включает аэрозольный (воздушно-капельный путь) и контактный (пищевой и контактно-бытовой). К особенностям эпидемиологии скарлатины относят наличие периодических подъемов и спадов заболеваемости.2) Решающая роль в возникновении скарлатины принадлежит уровню антитоксического иммунитета. При его отсутствии или несостоятельности в момент заражения развивается скарлатина, в остальных случаях (достаточный уровень антитоксического иммунитета, но истощен антибактериальный противострептококковый иммунитет) возникают другие формы стрептококковой инфекции – ангина, рожа и т.д. Патогенез скарлатины складывается из 3 ключевых компонентов: септического, токсического и аллергического, все они находятся в тесной связи друг с другом. Инкубационный период при скарлатине составляет в среднем 2–7 дней. Начало болезни острое – с повышением температуры тела, нарастанием симптомов интоксикации, болей в горле. На 1–2 сутки болезни появляется мелкоточечнаясыпьна гиперемированном фоне, с локализацией на груди, животе, сгибательной поверхности рук, внутренней поверхности бедер. При осмотре у заболевшего помимо сыпи выявляют белый дермографизм, ангину «пожар в зеве» или «пылающий зев» (от катарального до некротического), шейный лимфаденит, тахикардию. Через 2–5 дней температура тела снижается, сыпь угасает, густо обложенный язык постепенно очищается, на нем выделяются сосочки («малиновый» язык). На 2 неделе на пальцах рук и ног появляется пластинчатое шелушение, тахикардия сменяется брадикардией, появляется приглушенность сердечных тонов, систолический шум, артериальное давление снижается (скарлатинозное сердце).После перенесенной скарлатины формируется антитоксический иммунитет, нейтрализующий экзотоксины любого типа стрептококка при последующих заражениях.3) На современном этапе диагноз скарлатины выставляется на основании данных эпидемиологического анамнеза, клинических проявлений и результатов лабораторных исследований.Для постановки этиологического диагноза проводится бактериологическое исследование. При невозможности или неэффективности бактериологического исследования допустимо использовать молекулярные методы диагностики (ПЦР). В настоящее время широко распространены методы экспресс-идентификация инфекции, вызванной стрептококками группы А, в пробах от больных.4) С 2010 к 2021 гг. имеются тенденции к снижению заболеваемости скарлатиной (с 55,5 до 9 тыс. заболевших), однако с 2021 г. к 2022 г. отмечается повышение заболеваемости скарлатиной (с 9 до 27,2 тыс. человек). В России скарлатиной заболевают преимущественно дети от 0 до 14 лет (доля детей данного возраста от общего числа заболевших скарлатиной составляет от 97,8% до 98,9% в период с 2010 по 2022 гг.).5) Согласно действующим стандартам специализированной медицинской помощи при скарлатинебактериологическаядиагностика скарлатины может включать А26.08.005 «Бактериологическое исследование слизи с миндалин и задней стенки глотки на аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы(стрептококк)», в частности на S. pyogenes, а также А26.30.004 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам и другим лекарственным препаратам». Классически культуральное исследование при скарлатине заключается в посеве мазка из зева на кровяной агар. Идентификация при бактериологическом исследовании S. pyogenes проводится на основании морфологических особенностей роста; фенотипических характеристик и антигенной структуры возбудителя (серологический метод).Таким образом, цель и задачи работы достигнуты.СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВПриказ Минздрава России от 24.12.2012 № 1362н "Об утверждении стандарта специализированной медицинской помощи детям при скарлатине средней степени тяжести" (Зарегистрировано в Минюсте России 15.03.2013 № 27718)Приказ Минздрава России от 24.12.2012 № 1417н "Об утверждении стандарта специализированной медицинской помощи детям при скарлатине тяжелой степени тяжести" (Зарегистрировано в Минюсте России 25.03.2013 № 27873)Постановление Главного государственного санитарного врача РФ от 28.01.2021 № 4 (ред. от 25.05.2022) "Об утверждении санитарных правил и норм СанПиН 3.3686-21 "Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней" (вместе с "СанПиН 3.3686-21. Санитарные правила и нормы...") (Зарегистрировано в Минюсте России 15.02.2021 № 62500)Методические указания МУ 3.1.1885-04 "Эпидемиологический надзор и профилактика стрептококковой (группы А) инфекции" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 4 марта 2004 г.)Александрова Г. А., Ахметзянова Р.Р., Голубев Н. А. и др. Здравоохранение в России. 2023: Стат.сб./Росстат. - М., 2023. – 179 с.ВоробьевА.А, Быков А.С., Зверев В.В. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. 3-е изд., перераб. и доп, 2022. – 272 с.Геппе Н. А. Детские болезни : учебник / Геппе Н. А. - Москва : ГЭОТАР-Медиа, 2018. - 760 с.Глушкова Е. В. и др. Клинико-эпидемиологическая характеристика скарлатины в России //Эпидемиология и Вакцинопрофилактика. – 2023. – Т. 22. – №. 3. – С. 14-25.Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология - Санкт-Петербург :СпецЛит, 2012. - 760 c.Малеев В.В. Инструкция по применению реагента для взятия, транспортировки и хранения мазков из верхних дыхательных путей «Транспортная среда для хранения и транспортировки респираторных мазков» (утв. Зам. директора Федерального бюджетного учреждения науки «Центральный исследовательский научно-институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 10 августа 2017 г.)Новосад Е.В. Скарлатина у детей : учебное пособие / Новосад Е.В. [и др.].Москва : ФГАОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова, – 2020. – 60 с.Учайкин В. Ф. Инфекционные болезни у детей : учебник / под. ред Учайкина В. Ф. , Шамшевой О. В. - Москва : ГЭОТАР-Медиа, 2021. - 920 с.Шпынев К. В. и др. Streptococcuspyogenes: характеристика микроорганизма, выделение, идентификация и определение чувствительности к антибактериальным препаратам //КМАХ. – 2007. – Т. 9. – №. 2. – С. 104-19.Ющук Н. Д. Инфекционные болезни. Национальное руководство. Краткое издание / под ред. Н. Д. Ющука, Ю. Я. Венгерова. - Москва : ГЭОТАР-Медиа, 2022. - 848 с. : ил.Ющук Н. Д. Инфекционные болезни : учебник / Н. Д. Ющук, Г. Н. Кареткина, М. М. Гаджикулиева. - 6-е изд. ,перераб. и доп. - Москва : ГЭОТАР- Медиа, 2022. - 520 с.Федеральная служба государственной статистики.[Электронный ресурс].URL: https://rosstat.gov.ru/(дата обращения:16.03.24).Всемирная организация здравоохранения (15 декабря 2022 г.). Новости о вспышках болезней. Рост числа случаев скарлатины и инвазивной стрептококковой инфекции группы А – данные по нескольким странам. [Электронный ресурс]. URL: https://www.who.int/ru/emergencies/disease-outbreak-news/item/2022-DON429(дата обращения:16.03.24). Управление Роспотребнадзора по Кировской области.[Электронный ресурс]. URL:https://43.rospotrebnadzor.ru/news/detail.php?ID=6305&sphrase_id=113849(дата обращения:16.03.24).Haemolysis of Streptococci and its types with examples. [Электронный ресурс]. URL:https://microbiologyinfo.com/haemolysis-of-streptococci-and-its-types-with-examples/ (дата обращения:16.03.24).Медицинская компания ИНВИТРО. [Электронный ресурс]. URL:https://www.invitro.ru/(дата обращения:16.03.24).Экспресс-тест РЭД на Стрептококк группы А. [Электронный ресурс]. URL:https://www.test-medical.ru/ekspress-testy/streptokokk-gruppy-a.html(дата обращения:17.03.24).ПРИЛОЖЕНИЯПриложение АФакторы патогенности и строение S. pyogenesСхематическое изображение строения клетки S. pyogenes, поверхностных и секретируемых факторов вирулентностиПриложение БЭкспресс-тест на Стрептококк группы АПриложение ВБиохимические свойства бета-гемолитических стрептококков